一、产品概述由艾美捷代理Bethyl Laboratories推出的兔源抗小鼠Ki-67Mki67蛋白多克隆抗体货号IHC-00375经抗原亲和纯化专门优化用于免疫组织化学IHC检测。Ki-67是被广泛接受的细胞增殖标志物在细胞周期的G1、S、G2及M期表达而在静止期G0细胞中完全缺失。该蛋白定位于细胞核其表达水平与多种肿瘤的增殖指数、分级及预后密切相关。本抗体识别小鼠Ki-67蛋白C端区域的特异性表位适用于福尔马林固定石蜡包埋FFPE组织切片及冰冻切片的增殖细胞检测是临床前研究及肿瘤模型评估的可靠工具。二、详细规格参数 | 规格靶标 | Ki-67反应种属 | 小鼠应用 | IHC免疫组织化学宿主 | 兔克隆性 | 多克隆形式 | 全IgG免疫原 | 小鼠Ki-67蛋白第1875–1925位氨基酸之间的区域参考序列CAA58026.1抗体类型 | IgG偶联物 | 未偶联纯度 | 抗原亲和纯化抗原种属 | 小鼠浓度 | 250 ug/ml储存温度 | 2 - 8 °C有效期 | 自收货之日起1年缓冲液 | Tris缓冲盐水含0.1% BSA及0.09% 叠氮钠注根据抗体制备记录该抗体识别的表位精确对应于小鼠Ki-67蛋白第1650–1700位氨基酸GeneID 17345蛋白编号CAA58026.1。不同数据库注释可能存在异构体差异但本抗体经验证可特异性检测全长Ki-67。三、产品制备与质量控制本抗体采用固相载体固定的小鼠Ki-67特异性表位进行亲和纯化。免疫原为重组蛋白或合成肽段对应小鼠Ki-67蛋白C端附近区域。免疫球蛋白浓度通过比尔定律测定1 mg/ml IgG在280 nm处吸光度为1.4。每批次质控标准IHCFFPE对小鼠脾脏、胸腺、小肠或肿瘤组织切片进行染色应在生发中心、隐窝基底及肿瘤增殖区呈现清晰的核阳性信号而静息淋巴细胞或上皮细胞阴性。特异性验证使用Ki-67敲除组织或抗体预吸附实验确认信号特异性。批次间一致性通过对照组织切片的染色强度及阳性率进行比对。四、推荐应用与实验条件本抗体经优化主要用于免疫组织化学检测。以下为推荐的起始条件应用 | 推荐稀释度 | 备注IHC福尔马林固定石蜡包埋切片 | 1:100 – 1:500 | 必须进行抗原修复。推荐使用Tris-EDTA缓冲液pH 9.0进行热诱导抗原修复可显著增强染色信号。也可试用枸橼酸盐缓冲液pH 6.0但效果可能略逊。IHC冰冻切片 | 1:100 – 1:500 | 切片固定后如4%甲醛或丙酮可直接染色抗原修复通常非必需但可尝试温和修复。注意 | - | 在某些样本或实验体系中抗体可进一步稀释至1:1000以上建议使用者进行梯度滴定优化。五、背景信息Ki-67是一种高分子量核蛋白小鼠Ki-67分子量约320–360 kDa由于高度重复序列及磷酸化电泳迁移率异常其表达严格与细胞周期偶联细胞周期依赖性表达在G0期完全缺失G1早期开始出现S期和G2期逐渐累积M期达到峰值有丝分裂结束后迅速降解。因此Ki-67阳性率直接反映细胞群体的增殖分数。亚细胞定位动态变化在间期定位于核仁及核基质在M期与染色体表面结合参与维持染色体外周结构。分子功能虽然具体生化活性尚未完全阐明但研究表明Ki-67参与核仁结构的组织与维持异染色质与常染色质边界的划定有丝分裂期间核膜重建的调控核糖体RNA合成与核仁纤维中心相关。研究及诊断价值Ki-67是组织病理学中最经典的增殖标志物具有以下应用肿瘤分级与预后判断在乳腺癌、淋巴瘤、胶质瘤、肺癌等多种人类肿瘤中Ki-67增殖指数阳性细胞百分比与肿瘤恶性程度、转移风险及患者生存期呈显著相关。本抗体虽针对小鼠但广泛用于人源肿瘤异种移植模型PDX、CDX 中评估人肿瘤细胞增殖活性。药物疗效评估在肿瘤学临床前研究中通过比较治疗组与对照组的Ki-67阳性率可快速评价抗增殖药物的效应。正常组织增殖区定位用于识别小肠隐窝、皮肤基底层、生发中心、胚胎组织等增殖活跃区域。六、储存与稳定性储存条件2 - 8°C切勿冷冻。冷冻会导致抗体聚集及非特异性背景升高。有效期自收货之日起1年在未稀释、2-8°C避光保存条件下可维持完整效价。运输条件冰袋冷藏运输收货后请立即存放于2-8°C。防腐剂缓冲液含0.09%叠氮钠可抑制微生物生长。注意叠氮钠会抑制HRP活性若用于非HRP检测系统如荧光则无影响若需去除可通过透析或脱盐柱处理。七、注意事项1. 仅限科研使用不得用于临床诊断或治疗。本抗体针对小鼠抗原不保证对人Ki-67的交叉反应若需检测人样本请选择人反应性产品。2. 抗原修复至关重要对于FFPE切片必须进行热诱导抗原修复否则染色信号极弱或完全阴性。推荐优先尝试Tris-EDTA pH 9.0缓冲液。3. 安全操作叠氮钠有毒操作时请佩戴手套。废液请按有害物处理。4. 对照设置每次IHC实验必须设置阴性对照以同浓度兔IgG或抗体稀释液替代一抗及阳性对照已知高增殖小鼠组织如小肠或脾脏生发中心。5. 稀释优化不同固定时间、组织类型及检测系统可能导致最佳稀释度差异建议进行预实验梯度滴定1:100, 1:200, 1:500。