由艾美捷Bethyl Laboratories推出的本抗体为兔源多克隆抗体货号A300-000A特异性识别人BRCA1蛋白的C末端区域第1813位氨基酸至C末端。经抗原亲和纯化提供完整IgG分子形式未偶联任何标记物Unconjugated浓度为1000 µg/mL1 mg/mL。适用于免疫沉淀IP和蛋白质印迹WB分析。产品规格与理化参数参数项目 详细规格目标抗原 BRCA1乳腺癌易感基因1蛋白反应种属 人宿主来源 兔克隆类型 多克隆抗体形式 完整IgG免疫原 第1813位至C末端第1863位之间的区域亚型 IgG偶联物 无纯度 抗原亲和纯化抗原物种 人浓度 1000 µg/mL1 mg/mL保存条件 2–8 °C有效期限 自收货起1年缓冲体系 枸橼酸-磷酸盐-Tris缓冲液pH 7–8含0.09%叠氮化钠浓度测定依据采用比尔定律Beer’s Law标准为1 mg/mL IgG在280 nm波长处的吸光值A280为1.4。抗原背景BRCA1蛋白的功能与结构BRCA1Breast Cancer Type 1 Susceptibility Protein是一种重要的肿瘤抑制蛋白其种系突变与女性乳腺癌和卵巢癌的易感性显著相关。核心功能参与DNA损伤应答与细胞周期检查点调控维持基因组完整性调控多种相互作用蛋白的活性涉及基因转录、转录抑制、蛋白磷酸化和泛素化等过程作为E3泛素连接酶RING finger蛋白53RNF53参与底物蛋白的泛素化修饰本抗体的靶向优势识别C末端区域1813–1863适用于检测全长BRCA1以及保留C末端的截短突变体。该区域包含部分BRCT结构域对功能研究具有重要意义。别名信息BRCA1、BRCC1、BROVCA1、FANCS、IRIS、PNCA4、PPP1R53、PSCP、RNF53、BRCAI、早期发作乳腺癌1、范可尼贫血互补群S。生产与纯化流程1. 免疫原设计选择人BRCA1蛋白C末端区域第1813–1863位氨基酸的合成肽段或重组蛋白2. 免疫方案免疫兔诱导产生多克隆抗血清3. 亲和纯化将表位特异性肽段固定在固相支持物上从抗血清中亲和捕获特异性抗体4. 浓度标定A280法1 mg/mL对应吸光值1.45. 缓冲体系Tris-枸橼酸-磷酸盐缓冲液pH 7–8含0.09%叠氮化钠作为防腐剂适用范围与推荐使用条件 重要说明本抗体的应用经验主要集中于免疫沉淀IP和Western blotWB。使用前建议根据样本类型和表达丰度进行预实验优化。应用技术 推荐使用条件 备注免疫沉淀IP 6 µg抗体/毫克裂解液 按总蛋白质量计算抗体用量蛋白质印迹WB 1:1,000 – 1:10,000 推荐使用3–8% Tris-醋酸酯凝胶Western blot 详细操作指南标准WB流程细胞裂解液以下参数已由生产实验室验证并推荐凝胶类型3–8% Tris-醋酸酯梯度胶BRCA1分子量较大约220 kDa低浓度凝胶有助于大分子量蛋白的有效分离和转移封闭液5% 脱脂牛奶-TBST抗体稀释液5% 脱脂牛奶-TBST与封闭液一致一抗孵育过夜推荐4°C摇床孵育或室温过夜二抗山羊抗兔IgG重链轻链货号 A120-101P或其他等效产品注意对于细胞裂解液样本的直接Western blot使用识别重链和轻链的二抗即可。免疫沉淀后Western blot的特殊要求当本抗体用于免疫沉淀实验随后对免疫沉淀复合物进行Western blot检测时由于洗脱产物中包含用于IP的抗体来自兔的重链约55 kDa和轻链约25 kDa这些抗体片段会被常规的二抗抗兔IgG HL识别可能在目标蛋白BRCA1约220 kDa附近或轻链/重链位置产生干扰条带。优化方案生产实验室推荐1. 二抗选择使用抗兔IgG轻链HRP偶联抗体仅识别兔IgG轻链避免识别重链2. 封闭液补充在封闭缓冲液中加入5% 正常猪血清货号 S100-020进一步降低非特异性背景储存与稳定性储存条件温度2–8°C严禁冷冻防腐剂缓冲液含0.09%叠氮化钠有效抑制微生物生长分装建议如需长期保存可无菌分装为单次使用量仍储存于2–8°C不推荐-20°C可能引起蛋白聚集有效期自收货之日起12个月。超过有效期后使用建议重新验证效价。